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1、單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,28/10/2006,第四屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,第 頁,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,局部進展期散發(fā)性結直腸癌,CpG,島甲基子表型,和預后的關系,蔡國響 博士,復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院 大腸外科,復旦大學大腸癌診治中心,第六屆中國腫瘤學術大會上海,2010,1,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響局部進展,結直腸癌發(fā)病率居上海市區(qū)惡性腫瘤第二位。,30,40,結直腸癌患者最終死于復發(fā)轉移。,TNM,分期是目前預測復發(fā)轉移、指導輔助治療的最佳依據(jù)。,美國,SEER,數(shù)據(jù)顯示：部分,TNM

2、,期別和預后之間缺乏相關性（,A,期結直腸癌生存率反而高于,B,期）。,在,TNM,分期基礎上，發(fā)現(xiàn)和應用新的分子生物學指標提高預后判斷準確性是目前腫瘤研究熱點。然而，迄今尚未找到公認的具有臨床應用價值的預后分子指標。,研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,2,結直腸癌發(fā)病率居上海市區(qū)惡性腫瘤第二位。研究背景22/05/,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究背景,表遺傳學,遺傳學,非,DNA,序列變化引起的,可遺傳的基因表達改變,全基因組低甲基化,癌基因異常甲基化,抑癌基因過度甲基化,組蛋白異常修飾,3,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會

3、 蔡國響研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究背景,4,抑癌基因啟動子甲基化導致基因失表達,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究背景,正常大腸粘膜,大腸癌組織,基因啟動子,CpG,島非甲基化,基因啟動子,CpG,島甲基化,大腸癌相關腫瘤特異性甲基化位點：,p14,、,hMLH1,、,p16,、,MGMT,、,MINT1,5,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響研究背景,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究背景,CpG,島甲基子表型（,CIMP,）被

4、認為是繼染色體不穩(wěn)定（,CIN,）和微衛(wèi)星不穩(wěn)定（,MSI,）之后發(fā)現(xiàn)的第三種基因組不穩(wěn)定機制。,CIMP,反映多個抑癌基因的同時過度甲基化狀態(tài)。,CIMP,（）判斷標準：同時甲基化位點的數(shù)目達到,2/3,、,3/5,、,3/6,或,3/7,等及其以上。,結直腸癌,CIMP,的預后意義相關研究較少，存在一定的爭議。,文獻中未見同時研究三種基因組不穩(wěn)定機制（,CIMP,、,CIN,和,MSI,）的預后價值的研究。,6,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響研究背景,探討,各種臨床病理以及分子生物學指標和,/,期散發(fā)性結直腸癌預后的關系。,探討結直腸癌多基因甲基化的預后意義。,22/0

5、5/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究目標,7,探討各種臨床病理以及分子生物學指標和/期散發(fā)性結直腸癌預,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究對象,2004,年,7,月,11,月接受根治性手術切除的,50,例,/,期,散發(fā)性大腸癌患者的原發(fā)病灶,初治患者,明確的術后病理診斷,術前未行放化療,無任何腫瘤家族史,術后半小時內新鮮取材,8,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響研究對象,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究方法免疫組化檢測（,IHC,）,檢測指標：,k-ras,、,APC,、,p53,、,BAX,、,TGFR,IHC

6、,結果的判斷標準,腫瘤細胞胞漿（,k-ras,、,APC,、,Bax,、,TGFR,）,或胞核（,p53,）染色陽性者所占比例,10,為陽性,腺癌，癌組織,APC,陽性表達，定位于細胞漿,9,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響研究方法,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究方法流式細胞儀檢測（,FCM,）,倍體分析的判斷標準,DNA,指數(shù)（,DI,）腫瘤細胞的,G0/1,峰均道值,/,正常細胞的,G0/1,峰均道值,二倍體（,DI,1,）和異倍體（,DI1,）,異倍體者定義為,CIN,（）,二倍體,異倍體,10,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡

7、國響研究方法,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,檢測位點：,BAT25,、,BAT26,MSI,的判斷標準,微衛(wèi)星位點陰性：主峰（單一峰型）,微衛(wèi)星位點陽性：主峰新生峰,MSI,（）：,2,個位點中任意一個出現(xiàn)陽性結果,MSI,（）,MSI,（）,研究方法 微衛(wèi)星不穩(wěn)定（,MSI,）檢測,11,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響檢測位點,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究方法,甲基化特異性,PCR,（,MSP,）,檢測位點：,p14,、,hMLH1,、,p16,、,MGMT,和,MINT1,MSP,反應結果的判斷標準,未甲基化：,PC

8、R,產物電泳時只出現(xiàn)未甲基化條帶,甲基化：,PCR,產物電泳時出現(xiàn)甲基化條帶，無論是否出現(xiàn)未甲基化條帶,CIMP,（）：,3/5,個位點同時出現(xiàn)甲基化條帶,12,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響研究方法,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,SPSS11.5,軟件,生存分析：,壽命表法：計算無疾病生存（,DFS,）,單因素分析：,Kaplan-Meier法,多因素分析：,Cox回歸法,檢驗標準：,P,0.05,統(tǒng)計學分析,13,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響SPSS,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,性別：男性,23,例

9、，女性,27,例。,年齡：平均,54.54 11.76,歲（,22-80,歲）。,部位：結腸癌,18,例，直腸癌,32,例。,腫瘤最大徑：平均,5.24 2.53 cm,（,2-16cm,）。,組織類型：腺癌,39,例，粘液腺癌,11,例。,分化程度：高中分化,36,例，低分化,14,例。,脈管或神經侵犯：脈管侵犯（,+,）,6,例，神經侵犯（,+,）,4,例。,TNM,分期：,A,期,11,例，,B,期,7,例，,期,32,例。,14,研究結果臨床病理信息,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響性別：男,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,輔助化療：,36,例患

10、者接受含,5Fu,方案的靜脈化療,3,月以上,隨訪時間：全部病例隨訪超過,3,年，平均隨訪時間,47.64 17.68,月。,生存情況：死亡,13,例。,5,年總生存率,62,。,復發(fā)轉移：局部復發(fā),3,例，遠處轉移,19,例，復發(fā)或轉移,20,例（其中,2,例為遠處轉移同時合并局部復發(fā)）。,5,年無疾病生存率（,DFS,）,58,。,15,研究結果隨訪情況,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響輔助化療,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,腫瘤抗原檢測,：,CEA,異常升高者,9,例（,10,ug/l,），,CA19.9,異常升高者,10,例（,37 U/ml,

11、）,IHC,檢測：,蛋白表達陽性者：,k-ras,（,21,例）、,APC,（,20,例）、,p53,（,21,例）、,BAX,（,34,例）、,TGFR,（,29,例）,倍體分析：,二倍體,16,例，異倍體,33,例，,1,例因,CV,值大于,8,從分析中剔除。,MSI,檢測：,MSI,（）者,6,例（,12,）,MSP,檢測：,單一基因高甲基化者：,hMLH1,（,7,例）,MGMT,（,14,例）,p16,（,13,例）,p14,（,15,例）,MINT1,（,27,例）。,CIMP,（）者,12,例（,24,）。,16,研究結果分子生物學檢測,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會

12、 蔡國響腫瘤抗原,指標,p,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,年齡,（,60,歲，,60,歲）,0.815,/,性別,（男，女）,0.990,/,部位,（結腸，直腸）,0.111,/,腫瘤最大徑,(,3.0cm,3.0cm),0.620,/,組織類型（腺癌，粘液腺癌）,0.671,分化程度（高中分化，低分化）,0.681,/,脈管侵犯,(,陽性，陰性,),0.128,/,神經侵犯（陽性，陰性）,0.723,/,TNM,分期（,期，,期）,0.049,0.175,輔助化療（是，否）,0.781,/,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究結果,DFS,

13、生存分析（臨床病理指標）,17,p 值Kaplan-MeierCox Regression年,指標,P,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,CEA,（正常，異常）,0.304,/,CA19.9,（正常，異常）,0.141,/,IHC-kras,(,陽性，陰性,),0.657,/,IHC-APC,(,陽性，陰性,),0.596,/,IHC-p53,(,陽性，陰性,),0.700,/,IHC-BAX,(,陽性，陰性,),0.577,/,IHC-TGF,R,(,陽性，陰性,),0.434,/,倍體（異倍體，二倍體）,0.997,/,MSI,（陽性，陰性）,0.988,/,22

14、/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究結果,DFS,生存分析（分子生物學指標）,18,P 值Kaplan-MeierCox RegressionC,指標,P,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,MSP-hMLH1,（陽性，陰性）,0.691,/,MSP-MGMT,（陽性，陰性）,0.885,/,MSP-p16,（陽性，陰性）,0.027,/,MSP-p14,（陽性，陰性）,0.422,/,MSP-MINT1,（陽性，陰性）,0.356,/,CIMP,0.014,0.019,HR,（,95,CI,）：,2.935,（,1.193-7.220,）,22/05

15、/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,研究結果,DFS,生存分析（分子生物學指標）,19,P值Kaplan-MeierCox RegressionMS,/,期散發(fā)性結直腸癌無疾病生存分析（,Kaplan-Meier,法）,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,5y-DFS 66,5y-DFS 30,研究結果,DFS,生存分析（,CIMP,）,20,/期散發(fā)性結直腸癌無疾病生存分析（Kaplan-Meie,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,討論,CIMP,和結直腸癌預后的關系,文獻中關于,CIMP,和結直腸癌預后的關系存在一定的爭議。,多數(shù)研究,顯示,C

16、IMP陽性提示預后不良,，和本研究結果一致。,J Clin Oncol,（,2003,）,21:37293736,Clin Cancer Res,（,2007,）,13:60936098,Cancer Res,（,2008,）,68:8541-8546,少數(shù)研究顯示,CIMP陽性,者預后較好。,Gut,（,2009,）,58:9096,個別研究認為,CIMP沒有預后價值。,Virchows Arch(2009)455:485494,研究結果存在差異的可能原因：,甲基化基因,panel,不同。,CIMP,判斷標準不同。,實驗方法不同：,MSP,、,MethyLight,、,Pyrosequencing,。,21,22/05/2010第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響討論C,22/05/2010,第六屆中國腫瘤學術大會 蔡國響,討論,-,單基因高甲基化和結直腸癌預后的關系,本研究顯示在,CIMP,的,5,個,panel,基因中，,p16,基因的高甲基化可能在結直腸癌的復發(fā)轉移機制中扮演重要角色。,p16,是重要的細胞周期調控基因，其編碼產物可與,Cyclin D,競爭結合,CDK4/6,，抑制